Diagnosis of canine leptospirosis: evaluation of two PCR assays in comparison with the microagglutination test / Diagnóstico de leptospirose canina: avaliação de dois ensaios de PCR em comparação com o teste de microaglutinação

Canine leptospirosis is definitely diagnosed by demonstrating seroconversion in paired serum samples from the acute and convalescent period by the microagglutination test (MAT). However, the application of a polymerase chain reaction (PCR) assay can provide earlier confirmation of suspected cases. The objective of this study was to evaluate two PCR assays used in diagnosis of human leptospirosis (lipL32 real-time PCR and rrs conventional PCR) in cultured microorganisms and experimentally contaminated samples (whole blood, serum, urine), and investigate their applicability in clinical samples from dogs with presumptive diagnosis of leptospirosis by using the MAT as a reference. The analytical sensitivity of the lipL32 real-time PCR was 1 genome equivalent per reaction, whereas that for the rrs conventional PCR was 10 genome equivalents per reaction. Both assays amplified the pathogenic strains but were negative when evaluating the DNA of other microorganisms that may be present in clinical samples. The lipL32 real-time PCR detected 100 bacteria/mL in whole blood samples, 1000 bacteria/mL in serum samples and 10 bacteria/mL in urine samples, whereas the rrs conventional PCR detected 1000 bacteria/mL in whole blood and serum samples and 100 bacteria/mL in urine samples. Seven out of the 51 samples from dogs with presumptive diagnosis of leptospirosis were considered as confirmed cases. ThelipL32 real-time PCR detected positive results in six of the seven confirmed cases, whereas the rrs conventional PCR detected four. The PCR assays evaluated proved to be useful diagnostic tools in the confirmation of canine leptospirosis when used together with the MAT.(AU)

O diagnóstico definitivo da leptospirose canina é geralmente realizado demonstrando a seroconversão em amostras do paciente no período agudo e de convalescença por serologia. No entanto, a aplicação de técnicas de PCR pode contribuir para a confirmação de casos suspeitos num período de tempo mais curto. O objetivo deste estudo foi avaliar dois ensaios de PCR publicados em humanos (PCR-lipL32 em tempo real e PCR-rrs convencional) em culturas puras e em amostras de sangue com anticoagulante, soro e urina experimentalmente contaminados. Posteriormente, investigamos a utilidade de ambos os ensaios de PCR em amostras clínicas de cães com suspeita de leptospirose tomando a técnica de microaglutinação (MAT) como referência. A sensibilidade analítica foi de 1 e 10 genoma equivalente por reação para PCR-lipL32 em tempo real e para PCR-rrs convencional, respectivamente. Ambos os ensaios amplificaram corretamente as 14 estirpes patogênicas, mas foram negativos para avaliar o ADN de outros microrganismos que poderiam estar presentes em amostras clinicas. Em nas amostras experimentalmente contaminadas PCR-LipL32 em tempo real detectou 100 bactérias/mL em sangue total, 1000 bactérias/mL em soro e 10 bactérias/mL em urina. Enquanto o PCR-rrs convencional detectou 1000 bactérias/mL em sangue total e soro e 100 bactérias/mL na urina. Dos 51 cães suspeitos, sete foram considerados casos confirmados pela MAT. O PCR-lipL 32 em tempo real detectou seis dos sete casos confirmados, enquanto o PCR-rrs convencional foi positivo em quatro deles. As técnicas de PCR avaliadas provaram ser uma ferramenta de diagnóstico útil na confirmação de casos clínicos caninos quando utilizados em conjunto com a técnica MAT.(AU)

Enzootic bovine leukosis: performance of an indirect ELISA applied in serological diagnosis

Bovine Leukosis Virus (EBLV) is a widely distributed pathogen agent in the bovine population of many countries, especially in dairy cattle. Once the bovine is infected, it remains as a virus carrier for life and such state is correlated with a specific antibody detectable level. In this study the evaluation of an indirect ELISA (Leucokit-La Plata) to detect antibodies against EBLV is presented. Comparing it with the Immunodiffusion as gold standard test, the sensitivity is 98.93 percent, the specificity 79.74 percent, the negative predictive value 99.56 percent and the positive predictive value 61.26 percent. The correspondence between both tests is 83.9 percent which is similar to the result mentioned by other authors (82.2 percent). The concordance was evaluated by calculating Kappa and Youden's J coefficients, obtaining values classified as good for both coefficients. Comparing Leucokit-La Plata and another commercial reference kit (Chekit Leucotest Bommeli AG, Bern Switzerland), the sensitivity (97.05 percent), specificity (94.11 percent), negative predictive value (92.30 percent) and positive predictive value (97.77 percent), were obtained. Applying Kappa and Jouden's Index (J) coefficients an almost perfect concordance was obtained between both kits. The Leucokit-La Plata is appropriate to apply to the commercialization of live bovines to export, bovine selection for hemo-vaccines and the implementation of control and eradication programmes.

O vírus da leucose bovina é um agente patogênico amplamente distribuído na população bovina de muitos países, principalmente naqueles com aptidão para leite. Uma vez infectado o bovino permanece como portador do vírus para toda a vida, e esse estado é correlacionado com o nivel detectável de anticorpos específicos. Neste trabalho apresenta-se a avaliação de um ELISA indireto (Leucokit-La Plata) para a detecção de anticorpos contra VLB. Comparando com a prova de imunodifusão como teste de referencia a sensibilidade é de 98.93 por cento; a especificidade de 79.74 por cento; o valor preditivo negativo de 99.56 por cento e o valor preditivo positivo 61.26 por cento. A correspondência entre as duas provas é de 83.9 por cento, semelhante ao resultados apresentados por outros autores (82.2 por cento). A concordância entre as duas provas foi avaliada calculando-se os coeficientes Kappa e J de Youden e os valores obtidos foram classificados como bons. Fazendo-se uma comparação entre Leucokit-La Plata e outro kit comercial de referência (Chekit Leucotest Bommeli AG., Bern Switzerland), obteve-se uma sensibilidade de 97.05 por cento, especificidade de 94.11 por cento, um valor preditivo negativo de 92.30 por cento e um valor preditivo positivo de 97.77 por cento. Os coeficientes Kappa e index de Youden deram uma concordância quase perfeita entre os dois testes. O equipamento Leucokit-La Plata é ideal para ser utilizado na comercialização de bovinos para exportação, para seleção de bovinos para hemovacinas e na implementação de medidas de contrôle e erradicação.